DNA氧化损伤修复基因hOGG1高表达细胞株的建立

• 作者: 卢仲毅 朱宇熹 王昱 许峰
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: hOGG1基因 共转染 彗星试验 DNA损伤修复
• 年，卷（期）: 2010,（7）
• 页码范围: 725-730
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1008.2010.00725

摘要

目的 联合pcDNA3.1(+)/Myc-HisA-hOGG1和pGL3 promoter荧光质粒稳定转染人肺腺癌A549细胞获得hOGG1基因高表达细胞株,并初步探讨转染细胞生物学特性的变化.方法 成功构建pcDNA3.1(+)/Myc-His A载体后,大量抽提阳性重组子并在Fu GENE 6的介导下联合pGL3 promoter荧光质粒转染A549细胞(转染组),同时设空白对照组(A549)和阴性对照组EPGL3+pcDNA3.1(+)/Myc-HisA转染的A549细胞].生物荧光检测转染细胞hOGG1 mRNA表达的改变,蛋白质免疫印迹法检测转染细胞hOGG1蛋白表达水平.将3组细胞于不同高氧条件下培养,相差显微镜观察形态学变化,彗星试验比较各组细胞对抗损伤和修复能力的情况,同时测定DNA氧化损伤标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的变化.结果 转染细胞荧光素酶稳定表达,蛋白印迹检测转染组hOGG1蛋白明显高于两对照组细胞,提示hOGG1基因高表达细胞株建立成功.相同高氧条件下,转染组形态学变化明显减轻,彗星细胞率和olive tail moment明显低于空白组和阴性对照组,修复完成率高,修复时间缩短(P<0.05),测定氧化损伤标志物8-OHdG明显下降,提示细胞对抗DNA损伤和修复能力均增高(P<0.05).结论 hOGG1基因的高表达可减轻细胞对DNA氧化损伤的敏感性,提升细胞DNA的修复能力.