抗猪隐孢子虫单克隆抗体的制备及鉴定

• 作者: 刘光辉 吴志明 宁长申 安春霞 张盼盼 张龙现 王强 闫若潜 黄磊
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 猪隐孢子虫 单克隆抗体 制备和鉴定 ELISA 免疫荧光
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 743-746
• 分类号: R382.2
• 字数: 3500字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2010.08.007

摘要

目的 筛选特异性强、亲和力高的抗猪隐孢子虫(Cryptosporidium suis)单克隆抗体(McAb),并探讨其生物学活性.方法 将纯化的猪隐孢子虫卵囊冻融和超声波处理后免疫BALB/c小鼠,取阳性免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合;经间接ELISA法筛选,有限稀释法进行克隆;用间接ELISA叠加试验、间接免疫荧光试验鉴定McAbs的免疫反应活性.结果 获得 3 株能稳定分泌抗猪隐孢子虫McAbs的杂交瘤细胞株,命名为1E1C5、1E11A5、 2B7A1,分别属于IgM、IgG3和IgG2a类;其细胞培养上清效价分别为1∶3 200、1∶1 600和1∶3 200,小鼠腹水效价分别为1∶1.6×105、1∶1.6×105和1∶0.8×105;ELISA 叠加试验表明3 株单抗可识别两个不同抗原位点,1E1C5有较高的亲和力;免疫荧光试验结果显示 3 株单抗均能与猪隐孢子虫卵囊壁反应,但与艾美耳球虫、人隐孢子虫(C.hominis)有微弱的交叉反应.结论 获得了3株可识别猪隐孢子虫卵囊壁的McAbs,为进一步开展猪隐孢子虫快速诊断研究奠定了基础.