乙型脑炎病毒E蛋白基因的原核表达及ELISA抗体检测方法的建立

• 作者: 关莎莎 刘昊 尹革芬 张丹 段博芳 段纲 王开艳 谭磊 金宁一 鲁会军
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 乙型脑炎病毒 E基因 克隆 表达 抗原性
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 390-394
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文

摘要

通过PCR方法扩增流行性乙型脑炎病毒(JEV)E基因,全长1 500 bp,将其连入经双酶切的pET-28a(+)载体,构建了重组原核表达质粒pET28a-E.将pET28a-E转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导,进行SDS-PAGE分析.结果显示,E基因在大肠杆菌BL21中获得高效表达,表达的蛋白分子质量约53 ku.Western-blot分析表明,该表达产物具有良好的抗原性.在此基础上,利用该蛋白初步建立了检测猪JEV抗体的间接ELISA方法,并用武汉科前生物制品公司生产的猪JEV ELISA抗体检测试剂盒同时对250份临床采集的猪血清样品进行了检测,结果这两种方法的符合率达到92%,表明建立的ELISA方法具有较高的灵敏性和特异性.