IgA亲和体随机组合噬菌体文库的构建和体外分子进化

• 作者: 曹洁 温宗梅 潘卫 蒋少华 贾建安 陈秋莉
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 肽库 免疫球蛋白A亲和体 串联重复序列 亲和力 分子进化
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1008.2010.00001

摘要

目的 构建IgA亲和体随机组合文库并进行体外分子进化,研究IgA亲和体分子结构与功能的关系.方法 基因合成两个IgA亲和体片段.3′ 端引入3个随机连接肽序列随机连接,克隆于噬菌粒展示载体pCANTAB5S,构建噬菌体展示随机组合分子文库.以人IgA为靶分子对该文库进行4轮亲和筛选.制备阳性筛选克隆的单克隆噬菌体,用ELISA鉴定IgA结合活性.结果 成功构建噬菌体展示IgA亲和体随机组合分子文库,库容量为3.4×10~7,滴度为1.6×10~(12) TU/L,阳性克隆占79%以上,序列分析IgA亲和体随机连接,随机连接肽序列呈随机分布.在人IgA分子诱导的分子进化过程中,展示多个IgA亲和体串联体的噬菌体比例明显增加,获得3种新型IgA亲和体组合分子结构形式:IgA亲和体二联体、三联体和四联体.ELISA结合实验表明IgA亲和体三联体和四联体的IgA结合能力远大于单体和二联体.结论 通过构建IgA亲和体噬菌体展示随机组合文库和体外分子进化的方法,获得多种新型组合分子,其中IgA亲和体三联体和四联体的IgA结合能力明显增加,提示通过有效的分子进化成功地获得了高亲和力的IgA结合分子.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	潘卫	第二军医大学基础部微生物学教研室	64	255	8.0	12.0
2	曹洁	第二军医大学基础部微生物学教研室	110	904	16.0	23.0
3	陈秋莉	第二军医大学基础部微生物学教研室	16	102	6.0	9.0
4	蒋少华	第二军医大学基础部微生物学教研室	10	76	5.0	8.0
5	温宗梅	第二军医大学基础部微生物学教研室	13	13	1.0	3.0
7	贾建安	第二军医大学基础部微生物学教研室	3	5	2.0	2.0