构建SPA和SPG单结构域随机组合噬菌体展示文库

• 作者: 唐萍 庞强 廖文婷 曹洁 李存枚 潘卫 邓松华 陈秋莉 黄德圣
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 噬菌体展示 随机连接肽 SPA SPG
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 729-733
• 分类号: R392.11|R394
• 字数: 3669字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2010.06.001

摘要

目的 构建免疫球蛋白结合分子金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)和链球菌蛋白G(SPG)单结构域随机组合噬菌体展示文库,为研究其分子功能与结构的关系奠定基础.方法 PCR扩增制备SPA的A、B、C 、D、 E结构域和SPG的B2结构域核苷酸片段,在片段两端通过引物引入XbaⅠ酶切位点和保护碱基,3′端引入3个氨基酸大小的随机连接肽核苷酸序列,各结构域核苷酸片段经XbaⅠ酶消化,在T4连接酶作用下随机相互连接并克隆于噬菌体展示载体pCANTAB5S,克隆产物转化E.coli DH5α,提取原代库质粒转化E.coli TG1,经M13K07辅助噬菌体拯救,构建成SPA和SPG单结构域随机组合噬菌体展示文库.结果 该噬菌体展示文库库容量为1.87×107 cfu,滴度为1.3×1014 TU/ml,文库的片段插入率近100%,其中插入多个结构域的阳性克隆占21.7%,序列分析显示各结构域之间的连接和随机连接肽序列具有随机性.结论 成功地构建了SPA和SPG单结构域随机组合噬菌体展示文库,该文库在库容量、多样性和随机性方面满足体外分子进化研究的要求.