半巢式PCR法构建天然噬菌体单域重链抗体文库

• 作者: 何庆华 涂追 许杨 陶勇
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 单域重链抗体 VHH 抗体 噬菌体文库 羊驼 半抗原
• 年，卷（期）: 2010,（19）
• 页码范围: 299-303
• 分类号: Q789
• 字数: 4182字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建天然噬菌体单域重链抗体文库,淘选可应用于食品安全检测的单域重链抗体.方法:以未经免疫的健康羊驼(Lama pacos)外周血为起始材料,提取RNA反转录为cDNA,根据重链抗体保守序列设计引物,通过半巢式PCR法扩增获得全套重链抗体可变区编码基因,将其克隆至噬菌粒pHEN1,电转化大肠杆菌TG1得到初级抗体库,辅助噬菌体KM13感染后得到噬菌体展示库.采用固相淘选法分别对3种人工抗原进行淘选.结果:单域重链抗体编码基因得到有效扩增,经10次电转化获得初级文库,命名为SNAL,实际库容量达到1.6×107个独立克隆,菌落PCR鉴定结果表明,克隆效率约为87%,辅助噬菌体救援后得到的展示文库命名为SNA-PDL,滴度达1013CFU/mL.对3种不同人工抗原DON-MBSA、NOR-BSA和AFB1-OVA的淘选均有富集现象.结论:构建了天然噬菌体单域重链抗体文库,文库的多样性较好,可以用于后续淘选.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许杨	南昌大学食品科学与技术国家重点实验室	122	1863	22.0	38.0
5	涂追	南昌大学食品科学与技术国家重点实验室	19	126	5.0	11.0
9	何庆华	南昌大学食品科学与技术国家重点实验室	25	251	10.0	15.0
13	陶勇	南昌大学中德联合研究院	5	39	3.0	5.0