正交设计优化扁蓿豆ISSR反应体系的研究

• 作者: 孙启忠 师文贵 李志勇 李鸿雁 王小丽 邢建军
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 扁蓿豆 ISSR 正交设计 反应体系 优化
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 97-103
• 分类号: S551
• 字数: 1010字
• 语种: 中文

摘要

以扁蓿豆(Medicago ruthenica)为试材,采用改良的CTAB法提取DNA,利用正交设计L16(45)探讨10×PCRBuffer(含Mg2+)、dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶及模板DNA用量对扁蓿豆ISSR-PCR反应的影响,正交试验的结果采用直观分析和方差分析相结合.建立了扁蓿豆的ISSR-PCR优化反应体系,在25 μL反应体系中,TaqDNA聚合酶1.5U,10 × PCR Buffer(含Mg2+)2.0 mmol/L,模板DNA 0.5 ng/μL,dNTPs 0.6 mmoL/L,引物0.9 μmol/L.同时探讨引物HZD09211的最适退火温度为52.3℃.2个不同引物对20份扁蓿豆材料DNA进行ISSR-PCR扩增,结果显示该体系具有较高的稳定性.