猪囊尾蚴dUTPase基因的克隆、表达及其产物的酶学活性分析

• 作者: 乔军 刘振勇 吕志慧 张艳 才学鹏 景志忠 窦永喜 郑亚东 骆学农
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: dUTP焦磷酸酶 猪囊尾蚴 原核表达 酶学活性
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 192-199
• 分类号: S8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.01.023

摘要

[目的]克隆、表达猪囊尾蚴dUTPase基因并分析其酶学活性.[方法]通过RT-PCR的方法克隆猪囊尾蚴dUTPase基因,将其与pET载体连接并在原核系统中高效表达;表达产物经Ni柱纯化后进行酶学活性测定.[结果]序列分析表明猪囊尾蚴dUTPase基因与六钩蚴的dUTPase基因核苷酸同源性为100%,而且其氨基酸序列中同样存在5个保守基序.SDS-PAGE显示在21kD附近出现与目的蛋白大小相符的特异条带,表达产物经纯化后dUTPase的含量为2.863 mg·mL~(-1).酶学活性试验证实重组dUTPase能特异性降解dUTP,同时EDTA可以抑制dOTPase 的活性;而Mg~(2+)可以增强猪囊尾蚴dUTPase的活性.[结论]成功克隆表达了猪囊尾蚴dUTPase基因并鉴定了它的酶学活性,为进一步研究dUTPase在猪囊尾蚴中的生物学功能奠定了基础,同时也为抗猪囊尾蚴病的药物设计和开发提供了研究基础.