HE4融合蛋白基因的构建、表达及鉴定

• 作者: 卢仁泉 吴兴中 胡娟 郭林
• 来源期刊: 中国实验诊断学
• 学科: 生物学
• 关键词: 卵巢癌 HE4基因 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 17-19
• 页数: 3页
• 分类号: Q786
• 字数: 2669字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4287.2010.01.006

摘要

目的 重组及表达人附睾上皮分泌蛋白4(HE4)的融合蛋白,为建立一种新的卵巢癌的诊断方法奠定基础.方法 提取人卵巢癌细胞株SKOV3中总RNA,应用RT-PCR技术扩增出HE4基因,将其与PUCm-T载体连接,转化入TOP10菌中进行克隆并测序鉴定.进一步构建PET28a-HE4表达体系,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,最终在BL21菌中表达HE4融合蛋白(含有His-Tag),并进行SDS-PAGE及western blot鉴定.结果 SKOV3细胞株提取的RNA经RT-PCR扩增后得到一条400 bp左右的DNA片断,经测序鉴定含HE4基因序列;成功构建了HE4融合蛋白的重组表达质粒;并在大肠杆菌中实现了可溶性高表达,经western blot鉴定为HE4融合蛋白.结论 采用原核表达方法可获得高纯度的HE4融合蛋白,为进一步开发HE4诊断试剂打下基础,为卵巢癌的诊断开辟新途径.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴兴中	复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系	18	118	5.0	10.0