肿瘤血管内皮抑素tumstatin腺相关病毒载体的构建及其功能的初步鉴定

• 作者: 于磊 孙岩 李娜 雷铭德 韩瑞发
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 自身抗原 胶原Ⅳ型 肿瘤内皮抑素 腺相关病毒 人脐静脉内皮细胞
• 年，卷（期）: 2010,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1100-1103
• 分类号: R73
• 字数: 3452字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2010.07.008

摘要

目的:探讨腺相关病毒(rAAV)-肿瘤内皮抑素(tumstatin)(简称rAAV-Tum)栽体的构建及其生物学效应的初步鉴定.方法:用PCR扩增tumstatin序列至pAAV-MCS载体,构建pAAV-Tum;采用AAV-Helper Free System包装系统、"氯仿-PEG/NaCl沉淀-氯仿抽提"及冰乙醇沉淀法进行AAV的包装、纯化和浓缩;用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)对rAAV-Tum生物学效应进行初步鉴定.结果:成功构建pAAV-Tum载体,并经酶切、PCR及测序证实;rAAV病毒颗粒滴度达2 × 1010 v.p/mL,浓缩后可达到2×1011～12 v.p/mL;rAAV-Tum可以分泌内皮抑素,诱导HUVEC凋亡.结论:成功构建rAAV-Tum腺相关病毒,体外实验表明该病毒能高效诱导内皮细胞的凋亡.