基于易错PCR的黄曲霉毒素解毒酶体外分子定向进化

• 作者: 刘大岭 姚冬生 张赛 胡亚冬 谢春芳 邢克克
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 黄曲霉毒素解毒酶 稳定性 定向进化 易错PCR
• 年，卷（期）: 2011,（7）
• 所属期刊栏目: 生物催化与生物转化
• 页码范围: 1100-1108
• 分类号: Q81
• 语种: 中文

摘要

运用定向进化-易错PCR方法,提高黄曲霉毒素解毒酶的活力及稳定性,并结合辣根过氧化物酶(HRP)-隐性亮绿(RBG)快速高通量筛选系统,构建了库容约为104的突变体库.经过两轮易错PCR,最终分别获得了耐高温70℃突变酶A1773、pH 4.0稳定性的突变酶A1476,pH 4.0和pH 7.5均表现稳定性的突变酶A2863,其酶活力比野生酶分别提高了6.5倍、21倍和12.6倍.经序列分析表明,发现突变酶A1773发生了Glu127Lys和Gln613Arg突变；突变酶A2863发生了Gly73Ser、Ile307Leu、Val596Ala、Gln613Arg突变；突变酶A1476发生了Ser46Pro、Lys221Gln、Ile307Leu和Asn47I1e突变.结果为进一步了解黄曲霉毒素解毒酶的结构与功能之间的关系提供了参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘大岭	暨南大学微生物技术研究所	33	277	10.0	14.0
3	谢春芳	暨南大学微生物技术研究所	24	202	9.0	13.0
5	邢克克	暨南大学微生物技术研究所	2	18	1.0	2.0
11	胡亚冬	暨南大学微生物技术研究所	7	47	4.0	6.0
12	张赛	暨南大学微生物技术研究所	1	18	1.0	1.0