荧光实时定量PCR定量水体中日本血吸虫尾蚴方法的建立

• 作者: 刘晨晨 周霞 张静 梁幼生 王文波 王本敬 诸葛洪祥 陈艳勤
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 日本血吸虫 尾蚴 荧光实时定量PCR 预警
• 年，卷（期）: 2011,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1075-1081
• 分类号: R383.2
• 字数: 6033字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2011.12.003

摘要

目的 建立快速、高效、特异的定量水体中尾蚴的数量和检测水体中日本血吸虫尾蚴残余基因组DNA的方法,来评估水体受日本血吸虫尾蚴污染的程度.方法 根据日本血吸虫基因组DNA中的3个多拷贝序列Sjrh1.0(序列号:U92488.1)、18S小亚基单位核楷体核酸基因(18SrRNA)序列(序列号:AY157226.1)和逆转录转座子SjR2的G55A序列(G55A)(序列号:AF412221.1),设计常规PCR引物和实时定量PCR引物,选取较好的靶序列建立SYBR GreenI实时定量PCR方法,绘制尾蚴数的对数与Ct值的标准曲线,并对疫水中日本血吸虫尾蚴残余的基因组DNA进行检测.结果 尾蚴数的对数与Ct值的标准曲线有良好的线性关系,相关系数r2为0.918 6,重复性良好.结论 本方法特异性高,灵敏,可定量水体中尾蚴数,对疫水检测有一定的预警作用.