草鱼呼肠孤病毒外衣壳蛋白VP7重组疫苗的构建及其免疫效力评价

• 作者: 刘林 徐诗英 曹广力 李婧慧 薛仁宇 贡成良 邹勇 陈辉
• 来源期刊: 湖南农业大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 草鱼呼肠孤病毒 VP7蛋白 重组疫苗 免疫效力
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产
• 页码范围: 659-664
• 分类号: S941.41
• 字数: 3696字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1238.2011.00659

摘要

为探明呼肠孤病毒(GCRV)外衣壳蛋白VP7基因工程亚单位疫苗产生的抗体效价水平和免疫保护力,用RT-PCR方法,从GCRV中扩增到VP7基因片段,并克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,得到重组质粒pET-VP7,酶切鉴定后,将pET-VP7转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,产生的重组蛋白经变性和复性后,按0.5、1.0、2.0 mg/尾的注射剂量分为3个免疫组,以等体积的氢氧化铝为佐剂进行注射.经SDS-PAGE电泳分析,发现了相对分子质量为34 000的蛋白表达带；Western Blot检测结果显示表达的蛋白具有很好的抗原性；间接凝集试验结果表明,3个免疫组均有抗体产生；攻毒试验结果表明,0.5、1.0、2.0 mg/尾重组蛋白剂量组的保护率分别为90％、85％、90％,对照组为0,表明所构建的疫苗具有较好的免疫作用.