内含子序列对CART基因转录调控作用的初步研究

• 作者: 南雪 吕洋 姚海雷 岳文 张静 李艳华 杨印祥 王思涵 裴雪涛 陈琳
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 可卡因-苯丙胺调节转录肽 内含子 转录调控 神经元限制性沉默因子 神经元限制性沉默元件
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 272-277
• 分类号: Q343
• 字数: 4936字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2011.04.009

摘要

目的 研究内含子序列对可卡因-苯丙胺调节转录肤(cocaine-and amphetamine-regulated transcript.CART)基因转录水平的调控作用.方法 分别以HeLa细胞和人源性间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的基因组DNA为模板,PCR扩增CART内含子Ⅰ(Intron)、CART截短内含子Ⅰ(去除NRSE基序,NBSEnon Intron)序列,克隆入载体 pGL3-Basic-CART32,构建pGL3-Basic-CART32-Intron、pGL3-Basic-CART32-NRSEnon Intron 荧光素酶报告载体.经质粒酶切和DNA测序进行鉴定.将报告载体瞬时转染入NT2/CloneD1细胞系,进行荧光素酶活性的分析.取1×107NT2/CloneD1细胞,采用抗NRSF和抗IgG抗体进行染色质免疫共沉淀,分析NRSF与CART内含子区NRSE的体内结合情况.结果 构建的pGL3-Basic-CART32-Intron、pGL3-Basic-CART32-NRSEnon Intron报告载体经酶切和测序鉴定正确.pGL3-Basic-CART32-Intren荧光素酶活性相对pGL3-Basic-CART32下调57.9%(P<0.05),pGL3-Basic-CART32-NBSEnon Intron相对pGL3-Basic-CART32-Intron上调53.8%(P<0.05).在NT2/CloneD1细胞中,CART内含子区NRSE调控元件能与NRSF蛋白结合.结论 研究结果表明,CART内含子序列对CART基因转录发挥负调控作用,内含子中的NRSE序列参与介导了其时CART基因的转录负调控作用.