白细胞介素6重组逆转录病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 张赟 李廷玉 毕杨 陈洁 龚敏
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素6 逆转录病毒载体pSEB-3H PC12细胞 HEK293细胞
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 21-25
• 分类号: R34
• 字数: 4348字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2011.01.005

摘要

目的 构建特异性过表达大鼠IL-6基因的重组逆转录病毒载体,并在大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞和人胚肾HEK293细胞中检测IL-6的表达.方法 以大鼠骨髓间充质干细胞mRNA为模板,经PCR获得目的基因IL-6,将其定向克隆到逆转录病毒载体pSEB-3H中,构建重组逆转录病毒质粒pSEB-IL-6,经脂质体分别转染到PC12细胞和HEK293细胞中,应用Real-time PCR和ELISA的方法 在mRNA和蛋白质水平检测IL-6的表达变化.继而用HEK293细胞中包装获得的含有pSEB-IL-6的病毒颗粒进一步感染PC12细胞,Real-time PCR检测IL-6 mRNA的表达水平变化.结果 PCR电泳及酶切鉴定证实目的基因正确克隆至逆转录病毒载体中,其基因序列与Genbank报道一致;Real-time PCR和ELISA结果 均显示,逆转录病毒质粒pSEB-IL-6转染PC12细胞和HEK293细胞后,IL-6的表达水平较对照组显著上调;经pSEB-IL-6逆转录病毒颗粒感染的PC12细胞中,IL-6 mRNA表达水平较对照组提高4倍.结论 成功构建了特异性表达大鼠IL-6基因的重组逆转录病毒载体pSEB-IL-6,并获得了具有感染能力的逆转录病毒颗粒,感染真核细胞后可高表达IL-6,为进一步研究IL-6的功能及其在多种疾病中的免疫调节机制提供重要的分子手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李廷玉	重庆医科大学附属儿童医院儿童营养研究中心儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室	129	797	17.0	22.0
2	毕杨	重庆医科大学附属儿童医院儿童营养研究中心儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室	24	63	5.0	7.0
3	张赟	重庆医科大学附属儿童医院儿童营养研究中心儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室	2	0	0.0	0.0
4	龚敏	重庆医科大学附属儿童医院儿童营养研究中心儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室	2	4	1.0	2.0