副溶血性弧菌基因敲除方法的建立及应用

• 作者: 刘霞 周冬生 张义全 杨琳 杨瑞馥 谭亚芳 郭兆彪 高鹤 黄新祥
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 自杀载体 同源重组 无痕突变
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 188-192,后插2
• 分类号: Q95-33
• 字数: 3519字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2011.03.002

摘要

目的 摸索出一套副溶血性弧菌基因敲除的可靠方案,副溶血性弧菌致病相关基因的敲除对深入研究其致病机制有重要意义.方法 通过融合PCR技术将目的 基因上下游同源臂融合并克隆到自杀载体pDS132上,将重组质粒转化大肠杆菌S17λpir中,再接合转移到副溶血性弧菌菌株内,经pDS132质粒上sacB基因的反向筛选得到突变株.结果 成功构建了副溶血性弧菌RIMD2210633菌株ΔopaR,ΔtoxR和ΔaphA三个基因突变株.结论 通过自杀载体同源重组成功获得精确敲除的无痕突变株更有利于基因功能的研究,使后续副溶血性弧菌突变株与野生株的对比研究成为可能.