副溶血性弧菌微滴数字PCR定量方法的建立

• 作者: 唐静 姜英辉 方佩佩 李正义 王昌军 贾俊涛 赵丽青 马云
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 微滴式数字PCR(ddPCR) 副溶血性弧菌 定量检测 拷贝数
• 年，卷（期）: 2018,（19）
• 所属期刊栏目: 分析检测
• 页码范围: 252-257
• 页数: 6页
• 分类号: TS201.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2018.19.045

摘要

目的:采用微滴式数字PCR技术(Droplet digital PCR,ddPCR),建立副溶血性弧菌快速定量检测.方法:以副溶血性弧菌TLH基因为靶基因,验证确定ddPCR方法的特异性及定量检测的线性范围,以常检出副溶血性孤菌的海产品鳕鱼为样品进行阳性添加,确定方法的可行性.结果:本试验中采用ddPCR检测得到副溶血性弧菌特异性好,有效基因组DNA浓度范围为2～19440拷贝/20μL,分析得菌悬液浓度为50～4.86×105 CFU/mL,与3M测试片所得菌悬液浓度无显著性差异(p＞0.05),与荧光PCR相比,可以进行更低浓度检测且能准确定量.结论:副溶血性弧菌ddPCR定量检测技术特异性良好、灵敏度高、结果准确,具有实际应用价值.