UHS-拟蜘蛛拖丝蛋白基因转染小鼠成纤维细胞及其鉴定

• 作者: 宁方勇 安铁洙 张秋婷 朴善花 李晶 梁洋 王春生
• 来源期刊: 江西农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体 超高硫角蛋白启动子 真核表达载体 小鼠成纤维细胞 转基因
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 生物技术与工程
• 页码范围: 1202-1205,1235
• 分类号: Q781
• 字数: 2696字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2286.2011.06.031

摘要

为了获得转拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S的阳性小鼠成纤维细胞,本研究将前期工作中人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S和克隆获得的小鼠超高硫角蛋白启动子(UHS),与带有IRES序列和GFP报告基因的表达载体连接,构建真核表达载体UHS-2S-pIRES2-EGFP；将UHS-2S-pIRES2-EGFP线性化后,采用脂质体法转染小鼠皮肤成纤维细胞,通过G418筛选获得neo基因抗性阳性细胞.结果表明:(1)成功构建UHS-2S-pIRES2-EGFP；(2)转基因细胞的最佳G418筛选浓度为400μg/mL；(3)筛选获得呈梭形的转基因细胞,对其进行传代培养时,细胞增殖缓慢,细胞未呈现正常细胞的“S”型的生长曲线；(4) PCR检测结果显示,UHS-2S-pIRES2-EGFP载体已经整合到G418抗性细胞的基因组中.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宁方勇	东北林业大学生命科学学院	40	122	5.0	9.0
3	梁洋	东北林业大学生命科学学院	33	75	6.0	7.0
4	安铁洙	东北林业大学生命科学学院	75	199	8.0	10.0
5	王春生	东北林业大学生命科学学院	61	134	7.0	9.0
6	朴善花	东北林业大学生命科学学院	53	94	5.0	7.0
7	张秋婷	东北林业大学生命科学学院	13	37	3.0	5.0
8	李晶	东北林业大学生命科学学院	20	376	6.0	19.0