利用噬菌体表面展示技术克隆抗人DR5抗体可变区基因

• 作者: 刘峰涛 刘瑞敏 季泽俊 王明丽 白慧玲 马远方
• 来源期刊: 河南大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 噬菌体展示技术 单链抗体 死亡受体5
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 51-53
• 分类号: R392.11
• 字数: 2440字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-7606.2011.01.017

摘要

目的:利用噬菌体表面展示技术制备抗人DR5单链抗体.方法:从抗DR5杂交瘤细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增VH和VL基因,并利用重叠扩增PCR将VH和VL拼接为scFv基因.将scFv与PAK100载体通过相同的酶切位点连接后,转化大肠杆菌XL1-Blue,经VSCM13辅助噬菌体拯救,构建成鼠抗人DR5单链抗体库.以DR5作为固相筛选分子,对噬菌体展示肽库进行3轮"吸附-洗脱-扩增"生物筛选,从第3轮洗脱物中随机挑选10个单克隆噬茵体扩增后进行ELISA鉴定,对所筛选克隆进行DNA序列测定和通过phage-ELISA验证噬菌体单链抗体的结合特异性.结果:经过3轮筛选后,对随机选取的10个噬菌体克隆进行鉴定,其中4个具有和DR5结合的特异性.结论:利用噬菌体表面展示技术筛选单链抗体,结果更加可信.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	白慧玲	河南大学细胞与免疫学重点实验室	76	307	10.0	13.0
2	马远方	河南大学细胞与免疫学重点实验室	121	553	13.0	16.0
3	刘瑞敏	河南大学细胞与免疫学重点实验室	31	64	4.0	6.0
4	刘峰涛	河南大学细胞与免疫学重点实验室	15	22	2.0	4.0
5	季泽俊	河南大学细胞与免疫学重点实验室	3	1	1.0	1.0
6	王明丽	河南大学细胞与免疫学重点实验室	17	42	3.0	5.0