人IgE分子Fc段受体结合区的表达、纯化及功能鉴定

• 作者: 张大鹏 朱磊 李晶 杨扬 王皓 薛静亚 郭怀祖 钱卫珠
• 来源期刊: 现代免疫学
• 学科: 医学
• 关键词: IgE Fcε2-4 克隆表达 CHO 偶联抗IgE抗体
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 445-449
• 页数: 5页
• 分类号: R329.8
• 语种: 中文

摘要

利用哺乳动物细胞表达、纯化具有生物学功能的人IgE Fc段与受体结合的功能区(Fcε2-4).以CRL8033细胞株为模板,PCR扩增人IgE Fcε2-4的cDNA并构建到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,脂质体转染CHO-K1细胞并以G418加压筛选.利用有限稀释法、Dot-blot及FACS筛选出高表达目的蛋白的稳定细胞株并进行扩增.CHO-K1培养上清经偶联抗IgE抗体(Omalizumab)的亲和层析柱分离纯化后,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定纯度,并采用表面等离子共振(SPR)法对该蛋白与其抗体的亲和力进行检测.结果表明,SDS-PAGE显示最终获得了纯度高于95％的人IgE Fce2-4蛋白,呈二聚体状态,分子量约78 kD,SPR检测结果显示,该蛋白与Omalizumab抗体特异性高亲和力结合(kD值约3.8nmol/L).提示,本实验获得了结构及糖基化修饰正确的人IgE Fcε2-4结构域,为进一步研究其功能及探索新的抗体药物奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王皓		72	476	11.0	18.0
2	钱卫珠		11	25	3.0	4.0
3	朱磊		10	56	4.0	7.0
4	杨扬		3	8	1.0	2.0
5	李晶		14	62	5.0	7.0
6	郭怀祖		5	0	0.0	0.0
7	张大鹏		4	1	1.0	1.0
8	薛静亚		1	0	0.0	0.0