H5N1禽流感病毒抗原基因的体外转录及RNA标准品构建

• 作者: 吕恒 张锦海 王平 王忠灿 王长军 郑纪山 顾海涛 鲁娟东
• 来源期刊: 传染病信息
• 学科: 医学
• 关键词: H5N1亚禽流感病毒 克隆 体外转录
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 26-28
• 分类号: R575.1
• 字数: 2886字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-8134.2011.01.009

摘要

目的 通过基因克隆和体外转录,获得H5N1禽流感病毒血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、基质蛋白M(M)基因的RNA片段,为病原学检测提供阳性定量标准品.方法　设计H5N1禽流感病毒的HA、NA及M基因全长开放阅读框的克隆引物,提取H5N1禽流感病毒总RNA,用RT-PCR获得相应片段,分别连接至Pgem-T easy质粒,转化宿主菌XL10-Gold,然后提取阳性克隆的重组质粒DNA,测序鉴定后用限制性核酸内切酶Nde I酶切线性化,用T7 RNA聚合酶进行体外转录,产物用Dnase酶处理、纯化后测定浓度,用实时荧光定量PCR构建标准曲线进行验证.结果　获得含H5N1禽流感病毒HA、NA、M基因全长开放阅读框序列的准确定量拷贝数的RNA片段,质量浓度分别为503.9、379.2、437.8ng/μl.结论 获得的RNA片段可作为H5N1禽流感病毒核酸快速检测方法的阳性定量标准品.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张锦海		42	165	8.0	9.0
2	王长军		134	625	12.0	17.0
3	王忠灿		46	247	8.0	13.0
4	顾海涛		20	70	5.0	7.0
5	王平		21	58	5.0	6.0
6	郑纪山		25	64	4.0	5.0
7	鲁娟东		4	21	3.0	4.0
8	吕恒		19	63	5.0	7.0