抗人CD80单链抗体的构建、表达及与抗原结合的特性分析

• 作者: 孙杰 张彦军 朱华亭 邱玉华 郭静雅 陈昌友 陈明心 陈永井 黄赛男
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CD80 单链抗体 真核表达
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 153-157
• 分类号: R392.11
• 字数: 4356字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2011.02.013

摘要

目的:构建及表达抗人CD80单链抗体(ScFv),并初步研究其生物学功能.方法:采用RT-PCR法从分泌鼠抗人CD80mAb的杂交瘤细胞株(4E5)中克隆VH和VL基因.用重叠延伸拼接PCR方法构建具有前导肽的L-VH-Linker-VL单链抗体基因,并亚克隆至pIRES2-EGFP表达载体,脂质体法转染中华仓鼠卵巢细胞(CHO),G418加压筛选.纯化抗CD80-ScFv,并分析其对膜型CD80的识别.竞争抑制实验分析抗CD80-ScFv与相应抗原的结合能力.MTT法体外分析抗CD80-ScFv对CD80介导的共刺激信号的阻断作用.结果:构建的抗CD80-ScFv基因全长为828 bp,经测序含有信号肽和连接肽.实验获得稳定表达细胞株SA-Ⅱ,其培养上清与L929-CD80细胞的阳性结合率达98%以上.抗体纯化后产率约为15.12 mg/L,其能够识别Raji和Daudi细胞天然表达的CD80分子,结合率分别为96.6%和95.0%.抗CD80-ScFv对鼠源亲本抗体4E5与抗原结合的竞争抑制率达98.67%,并能阻断CD80介导的共刺激信号转导,抑制PBMC的增殖,增殖率下降43.48%.结论:成功建立了抗CD80-ScFv CHO细胞的表达株(命名为SA-Ⅱ),该抗体能够特异识别细胞表面膜型CD80分子并介导相应的生物学功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈永井	苏州大学医学部免疫学系	78	388	11.0	14.0
2	孙杰	中国科学院苏州纳米研究所	48	339	10.0	16.0
3	朱华亭	苏州大学医学部免疫学系	23	96	6.0	9.0
4	张彦军	苏州大学医学部免疫学系	6	26	4.0	5.0
5	黄赛男	苏州大学医学部免疫学系	6	26	4.0	5.0
6	郭静雅	苏州大学医学部免疫学系	7	39	4.0	6.0
7	陈昌友	苏州大学医学部免疫学系	7	31	4.0	5.0
8	陈明心	河南中医学院第一附属医院检验科	1	6	1.0	1.0