药用植物诃子ISSR-PCR反应体系的建立与优化

• 作者: 吴业剑 吴文如 李薇 梁倩影 赖小平
• 来源期刊: 广东药学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 诃子 简单序列重复区间 反应体系
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 天然药物化学
• 页码范围: 140-143
• 分类号: R282.5
• 字数: 3796字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-8783.2011.02.008

摘要

目的 建立和优化药用植物诃子的ISSR-PCR反应体系.方法 以诃子叶片为实验材料,采用CTAB法提取诃子DNA为模板,通过单因素和双因素实验,研究诃子ISSR-PCR反应体系中DNA模板、Taq DNA聚合酶、Mg2+、引物、dNTPs等的用量,以及退火温度对扩增结果的影响.结果 建立了适合诃子ISSR分析的反应体系和扩增程序,即在50μL体系中含有1×PCR Buffer、DNA模板50～100 ng、Taq DNA聚合酶3 U、Mg2+ 2 mmol/L、引物0.8 mmol/L、dNTPs 0.3 mmol/L.扩增程序为94℃预变性5 min;94℃变性30 s,根据不同引物的退火温度复性30 s,72℃延伸1.5 min,共35个循环;最后72℃延伸5 min;反应结束后,4℃保存.同时筛选出9条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物.结论 这一优化体系的建立为今后利用ISSR标记技术进行诃子鉴定及种质资源遗传多样性分析奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赖小平	广州中医药大学中药学院	353	3650	27.0	44.0
2	李薇	广州中医药大学中药学院	72	839	16.0	26.0
3	吴文如	广州中医药大学中药学院	33	201	8.0	13.0
4	吴业剑	广州中医药大学中药学院	1	0	0.0	0.0
5	梁倩影	广州中医药大学中药学院	2	4	1.0	2.0