新生儿惊厥相关基因KCNQ2定点突变及其蛋白表达的研究

• 作者: 刘俐 史瑞明 周熙惠 宋红霞 张葳 惠智艳
• 来源期刊: 中国当代儿科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: KCNQ2基因 定点突变 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 论著·临床研究
• 页码范围: 611-616
• 分类号: R722.1
• 语种: 中文

摘要

目的 在收集的1个良性家族性婴儿惊厥家系中发现KCNQ2基因c.812G>T(p.G271V)突变,探讨c.812G>T突变体及其真核表达载体的构建方法,并观察其在人胚肾(HEK)293细胞中的表达.方法 利用重叠延伸PCR和限制性内切酶法构建KCNQ2基因c.812G>T突变体真核表达载体pcDNA3.0-c.812G>T-KCNQ2,用脂质体转染法将KCNQ2质粒(野生型pcDNA3.0-KCNQ2或突变型peDNA3.0-c.812G>T-KCNQ2)与荧光真核表达载体pRK5-GFP共转染HEK293细胞,激光共聚焦显微镜下观察HEK293细胞,免疫荧光化学法检测蛋白质表达.结果 构建的突变体经DNA直接测序示KCNQ2基因cDNA第812位碱基G变为T,突变体在HEK293细胞中成功表达,野生型和突变型基因的蛋白质都在细胞膜上表达,提示KCNQ2钾通道孔区的突变c.812G>T并不影响蛋白的正常表达.结论 成功构建KCNQ2突变基因真核表达载体,并在HEK293细胞中表达KCNQ2蛋白,为突变型KCNQ2基因的功能研究及癫癎的分子发病机制研究奠定基础.