山地乌骨鸡β防御素Gal -2基因的克隆及酵母表达载体的构建

• 作者: 刘海燕 周光荣 岳华 张平 张焕容 杨发龙 汤承 黄兴
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（上半月）
• 学科: 农学
• 关键词: 山地乌骨鸡 β防御素 Gal -2基因 克隆 酵母 表达 载体
• 年，卷（期）: 2011,（10）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 16-19,23
• 页数: 5页
• 分类号: S831
• 语种: 中文

摘要

为了构建山地乌骨鸡β防御素Gal -2基因酵母表达载体,试验根据GenBank中鸡β防御素Gal -2基因序列设计引物,采用RT - PCR技术从山地乌骨鸡骨髓细胞中扩增出Gal -2基因,经PCR和酶切鉴定后测序,并采用DNAStar软件进行生物信息学分析；再根据毕赤酵母偏爱密码子和山地乌骨鸡β -防御素Gal -2成熟肽编码基因序列设计并合成1对引物,采用PCR技术从重组质粒pMD18 -T - Gal -2扩增出其成熟肽编码基因,并将其插入载体pPICZaA,构建重组质粒pPICZaA -Gal -2,将pPICZaA - Gal -2线性化,通过电击转入毕赤酵母菌株GS115,用1％甲醇诱导表达120 h,表达产物纯化后进行Tricine - SDS - PAGE电泳鉴定.结果表明:山地乌骨鸡β防御素Gal -2基因克隆成功；山地乌骨鸡β -防御素Gal -2成熟肽编码基因重组真核表达载体构建成功；山地乌骨鸡Gal -2基因在酵母中得到表达.