Kozak序列(+4G)对携带EGFP标签的人淀粉样前体蛋白751在CHO细胞中表达的影响

• 作者: 刘桥 周婷 庞蓓蓓 熊波 黄巍
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: Kozak序列(+4G) 人淀粉样前体蛋白751 增强型绿色荧光蛋白 阿尔茨海默病 真核表达
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 149-153,195
• 分类号: Q78|R749.16
• 字数: 4802字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2011.02.001

摘要

目的:观察Kozak序列(+4G)对稳定转染的人淀粉样前体蛋白(hAPP751)-EGFP融合真核表达载体在CHO细胞中表达的影响,为APP的水解代谢研究提供细胞模型.方法:分别将含Kozak序列(+4G)和不含Kozak序列的hAPP751全长基因片段亚克隆入pEGFP-N1表达载体,得到pEGFP-hAPP751(+4G)和pEGFP-hAPP751重组质粒,转染CHO细胞,通过G418筛选稳定转染细胞株,再用倒置荧光显微镜挑取绿色荧光强的细胞进行亚克隆,并观察融合蛋白的表达强度和细胞定位,最后用EGFP抗体通过Western印迹检测融合蛋白.结果:PCR、酶切和测序证明将含Kozak序列(+4G)和不含Kozak序列的hAPP751全长基因片段分别连入了真核表达载体pEGFP-N1中;荧光显微镜下观察pEGFP-hAPP751(+4G)稳定转染细胞的细胞膜和细胞质产生较强的绿色荧光,其中在细胞质中成不均匀颗粒状分布,Western印迹检测到相对分子质量约156 000的融合表达蛋白,与预期相符;pEGFP-hAPP751转染细胞,其绿色荧光十分微弱且在整个细胞均匀分布,Western印迹检测到相对分子质量约26 000的EGFP,但检测不到预期的hAPP751-EGFP融合表达蛋白.结论:Kozak序列(+4G)可以明显促进hAPP751的表达,获得稳定转染且高水平融合表达hAPP751-EGFP的细胞株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄巍	武汉市医学科学研究所基础医学研究室	14	20	3.0	3.0
2	庞蓓蓓	武汉市疾病预防控制中心病毒科	5	18	3.0	4.0
3	刘桥	武汉市医学科学研究所基础医学研究室	7	13	3.0	3.0
4	周婷	武汉市医学科学研究所基础医学研究室	7	30	3.0	5.0
5	熊波	武汉市医学科学研究所基础医学研究室	2	4	1.0	2.0