丙型肝炎病毒重要编码蛋白重组腺病毒载体的构建

• 作者: 刘娇 单晓亮 周帆 唐霓 陈庆美
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 农学
• 关键词: HCV编码蛋白 穿梭质粒 骨架质粒 同源重组 腺病毒
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 146-149,159
• 分类号: S8
• 字数: 2620字
• 语种: 中文

摘要

旨在构建含HCV core、E1、E2、F、NS3、NS5a和NS56基因的重组腺病毒载体.运用PCR技术扩增目的基因片段,通过酶切连接方法将上述7种基因片段克隆至穿梭质粒pAdTrack-TO4中,然后将重组质粒用Prne I线性化后与骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌中同源重组.用Pac I酶把重组腺病毒载体线性化后转染HEK293细胞后产生重组腺病毒颗粒.利用穿梭质粒中带有绿色荧光蛋白GFP对其感染效率进行监测.结果显示,酶切鉴定和测序结果均证实含core、E1、E2、F、NS3、NS5a和NS56基因的重组腺病毒构建成功,在感染的Huh7细胞中观察到绿色荧光蛋白GFP.成功制备了高滴度的腺病毒Ad-core、Ad-E1、Ad-E2、Ad-F、Ad-NS3、Ad-NS5a和Ad-NS5b,为后续研究莫定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘娇	重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室	3	14	1.0	3.0
2	陈庆美	重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室	2	2	1.0	1.0
3	周帆	重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室	1	1	1.0	1.0
4	单晓亮	重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室	1	1	1.0	1.0