DH结构域缺失对SGEF在293T细胞中定位的影响

• 作者: 俞岚 周建光 施庆国 李山虎 王洪涛 钱晓龙
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: SGEF DH结构域 载体构建 重叠PCR 基因表达 蛋白定位
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 163-167
• 分类号: Q78
• 字数: 3325字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2011.02.004

摘要

目的:通过构建带EGFP标签的SGEF基因DH结构域缺失的真核表达载体pEGFP-C1-SGEF-△DH并使其在293T细胞表达,观察DH结构域缺失后SGEF在293T细胞中的定位.方法:利用重叠PCR技术在pcDNA3.1-SGEF质粒上扩增缺失DH结构域的SGEF基因,然后将PCR产物亚克隆到真核表达载体pEGFP-C1上,对阳性克隆进行双酶切和测序鉴定,利用脂质体转染方法转染293T细胞,并用Western印迹和细胞免疫荧光技术对重组质粒pEGFP-C1-SGEF-△DH在293T细胞中的表达及其蛋白定位进行分析.结果:双酶切和测序鉴定表明,pEGFP-C1-SGEF-△DH真核表达质粒构建成功,转染实验发现该质粒能够在293T细胞中表达,表达产物主要定位在细胞核内.结论:构建了带EGFP标签的人SGEF基因DH结构域缺失的真核表达载体,该载体能够在哺乳动物细胞293T中表达,表达产物定位于细胞核,为进一步研究SGEF基因DH结构域的细胞生物学功能提供了一个重要的工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周建光	军事医学科学院生物工程研究所	74	296	8.0	14.0
2	李山虎	军事医学科学院生物工程研究所	27	69	5.0	6.0
3	俞岚	军事医学科学院生物工程研究所	6	5	2.0	2.0
4	钱晓龙	军事医学科学院生物工程研究所	12	23	3.0	4.0
5	施庆国	军事医学科学院生物工程研究所	15	14	3.0	3.0
6	王洪涛	军事医学科学院生物工程研究所	7	8	2.0	2.0