GFP-ATZ在HEK 293T中的表达及其细胞毒作用

• 作者: 沈玉先 王法财 王海萍
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞毒性
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 733-736
• 分类号: R345|R394.3
• 字数: 2523字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2010.06.002

摘要

目的 构建具有绿色荧光蛋白(GFP)标签的α1抗胰蛋白酶Z突变型(ATZ)的真核表达载体,在人胚胎肾细胞(HEK 293T)中验证表达情况及检测其对细胞的影响.方法以pcDNA3.1-zeo+-ATZ质粒为模版,设计引物,PCR扩增出ATZ的cDNA序列,插入真核表达载体 pEGFP-C1中,构建带有GFP标签的ATZ真核表达载体pEGFP-C1-ATZ,脂质体转染体外培养的HEK 293T细胞,Western blot、荧光显微镜和激光共聚焦显微镜检测GFP-ATZ在细胞中的表达、分布情况及其对细胞形态和分裂的影响.结果 ATZ片段成功插入pEGFP-C1表达质粒,在表达GFP的HEK 293T细胞内,绿色荧光呈弥散的全细胞分布,而表达GFP-ATZ的细胞绿色荧光分布于细胞质内;Western blot结果显示特异性条带,分子量大小与GFP-ATZ预期相符;GFP-ATZ的过度表达引起细胞出现不同程度的形态改变、分裂障碍、聚集体出现甚至死亡.结论 成功构建了具有绿色荧光标记的ATZ真核表达载体,GFP-ATZ的表达具有细胞毒性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈玉先	安徽医科大学省部共建重要遗传疾病基因资源利用重点实验室	69	1156	17.0	33.0
5	王海萍	安徽医科大学省部共建重要遗传疾病基因资源利用重点实验室	8	64	3.0	8.0
14	王法财	安徽医科大学省部共建重要遗传疾病基因资源利用重点实验室	22	82	6.0	8.0