H5N1禽流感病毒HA与NA基因克隆及分泌表达

• 作者: 刘宇鸽 吴蒙 彭敬 李改瑞 陆家海 陆杰
• 来源期刊: 中国公共卫生
• 学科: 医学
• 关键词: 流感病毒 H5N1 毕赤酵母 分泌表达
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 37-39
• 分类号: R183.3|Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆和表达H5N1型流感病毒血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因,为制备抗体和亚单位疫苗打基础.方法 采用PCR技术扩增H5N1型流感病毒H5A和N1A基因,克隆人含有醇氧化酶-1(AOX1)启动子和分泌信号肽序列的巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体Ppic9k中,构建重组载体;经电穿孔转化酵母宿主菌GS115,筛选高拷贝重组转化子,筛选后摇瓶培养,1%甲醇诱导表达;诱导培养上清经聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹(Western-blot)检测蛋白表达情况.结果 电泳和测序证实成功构建酵母表达载体Ppic9k-H5A和Ppic9k-NIA,重组蛋白在毕赤酵母中可以高效表达,表达蛋白分子量大小约为64和52 Kd,第3和第4天表达量最高;Western-blot检测显示,目的蛋白能与H5亚型的AIV血清结合.结论 成功克隆并表达H5N1型流感病毒HA、NA基因序列,为诊断试剂和疫苗开发等进一步研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陆家海	中山大学公共卫生学院医学统计与流行病学系	97	466	12.0	14.0
2	吴蒙	中山大学公共卫生学院医学统计与流行病学系	14	223	7.0	14.0
3	李改瑞	中山大学公共卫生学院医学统计与流行病学系	7	70	4.0	7.0
4	彭敬	中山大学公共卫生学院医学统计与流行病学系	2	6	2.0	2.0
5	刘宇鸽	中山大学公共卫生学院医学统计与流行病学系	3	24	2.0	3.0
6	陆杰	中山大学公共卫生学院医学统计与流行病学系	3	5	2.0	2.0