利用酵母双杂交系统鉴定甘蓝SOR与SRK胞外域片段间的相互作用

• 作者: 余浩 吴志刚 张贺翠 彭一波 朱利泉 杨昆 杨永军 杨红 王小佳 罗兵 薛丽琰 高启国 黄丹
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 结球甘蓝 自交不亲和 S位点受体激酶(SRK) S位点富含半胱氨酸蛋白(SCR) 酵母双杂交
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 1953-1962
• 分类号: S635.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.09.024

摘要

[目的]利用酵母双杂交系统鉴定甘蓝自交不亲和决定因子S位点富含半胱氨酸蛋白/S位点蛋白11(SCR/SP11)与S位点受体激酶(SRK)胞外域(eSRK)片段间可能的相互作用区域.[方法]以结球甘蓝B3为材料,利用分子克隆技术,分别构建以pGBKT7为载体的全长SCRB3、SCRB3-1、SCRB3-2的重组诱饵质粒;以pGADT7为载体的全长eSRKB3、eSRKB3-1、eSRKB3-2的重组激活域(AD)质粒.用PEG/LiAc法将上述重组诱饵质粒转化感受态酵母菌Y2HGold,重组AD质粒转化感受态酵母菌Y187;Y2HGold[pGBKT7-SCRB3-s]、Y187[pGADT7-eSRKB3-s]两两融合培养,观察交配菌在SD/-Trp-Leu/x-α-ga1/AbA(DDO/x/A)、SD/-Trp-Leu-Ade-His/x-α-gal/AbA(QDO/x/A)平板上的生长情况.[结果]酵母双杂交重组表达载体构建成功,且无毒性和自激活作用产生;9个试验组中只有SCRb3-1、SCRb3-2与eSRKBb3-1、eSRKb3-2重组表达质粒转化子两两组合的4个融合株在QDO/x/A平板上出现蓝色克隆,激活了报告基因AUR1-C MEL1、HIS3、ADE2.[结论]酵母双杂交系统适用于SCR与SRK蛋白相互作用的研究,初步确定了SCR与eSRK存在相互作用,SRK跨膜域的存在与否对其相互作用的研究没有影响.