甘蓝SCR、THL与SRK交替相互作用的酵母双杂交检测

• 作者: 常登龙 张贺翠 朱利泉 杨昆 杨永军 薛丽琰
• 来源期刊: 中国蔬菜
• 学科: 农学
• 关键词: 甘蓝 S位点受体激酶(SRK) S位点富含半胱氨酸蛋白(SCR) 类硫氧还蛋白(THL) 蛋白质互作 酵母双杂交
• 年，卷（期）: 2012,（24）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 14-26
• 页数: 13页
• 分类号: S635.1
• 字数: 10159字
• 语种: 中文

摘要

eSRK(S位点受体激酶胞外域)、SCR/SP11(S位点富含半胱氨酸蛋白-S位点蛋白11)和THL1(类硫氧还蛋白)是甘蓝自交不亲和性信号传导过程重要的3个元件.利用PCR技术获得两种甘蓝SCR2(class-Ⅱ)、eSRK2(class-Ⅱ)、THL1、SRKJ(class-I,SRK6激酶域)和eSRK28(class-I)的编码序列,并分别构建以pGBKT7为载体的SCR2、THL1的重组诱饵质粒和以pGADT7为载体的eSRK2、eSRK28、SRKJ的重组猎物质粒.利用酵母双杂交系统验证eSRK2-SCR2、eSRK28-SCR2、SRKJ-THL1的相互作用.重组质粒在宿主细胞中未产生毒性及自激活作用,表明重组表达载体构建成功;组合Y2HGold[pGBKT7-SCR2]×Y187[pGADT7-eSRK2]在三缺平板(SD/-Trp-Leu-His/x-α-gal/AbA,TDO/x/A)上生长出蓝色克隆,激活了报告基因AUR1-C、MEL1、HIS3;组合Y2HGold[pGBKT7-SCR2]×Y187[pGADT7-eSRK28]能够在二缺平板(SD/-Trp-Leu)上生长,但在三缺平板上不生长,表明不同单倍型SRK-SCR可能不发生相互作用;组合Y187[pGADT7-SRKJ]×Y2HGold[pGBKT7-THL1]能够在四缺平板上生长,激活了4种报告基因(AUR1-C、MEL1、HIS3、ADE2).相同的单倍型SRK与SCR之间能够相互作用,不同的单倍型之间不会发生相互作用;酵母中报告基因表达的数目和类型的差异反映了class-Ⅱ型内部的SCR-SRK和class-I的SCR-SRK互作强度,I型高于Ⅱ型;THL与SRK之间存在较高的互作强度.这为I型和Ⅱ型不同的自交不亲和性表型所依赖的3个起始信号传导元件之间的识别程度差异提供了直接证据和新内容.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱利泉	西南大学农学与生物科技学院植物生理生化实验室	66	505	13.0	19.0
2	杨昆	西南大学农学与生物科技学院植物生理生化实验室	27	125	7.0	10.0
3	杨永军	西南大学农学与生物科技学院植物生理生化实验室	4	12	3.0	3.0
4	常登龙	西南大学农学与生物科技学院植物生理生化实验室	4	12	3.0	3.0
5	薛丽琰	西南大学农学与生物科技学院植物生理生化实验室	3	6	2.0	2.0
6	张贺翠	西南大学农学与生物科技学院植物生理生化实验室	18	41	3.0	5.0