利用酵母双杂交系统鉴定羽衣甘蓝臂重复蛋白(ARC1)与结球甘蓝S位点受体激酶(SRK)激酶结构域的相互作用

• 作者: 任雪松 常登龙 张贺翠 朱利泉 李成琼 杨昆 杨永军 杨红 王小佳 薛丽琰 高启国
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 自交不亲和,臂重复蛋白(ARC1),S位点受体激酶(SRK),甘蓝,酵母双杂交
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 988-995
• 分类号: S635
• 字数: 5656字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2011.06.002

摘要

S位点受体激酶(SRK)和臂重复蛋白(ARC1)是芸薹属植物自交不亲和反应的两种重要的信号元件,SRK-ARC1之间的互作决定着自交不亲和反应的进程.本研究利用PCR技术获得结球甘蓝(Brasica oleracea var.capitata) SRK激酶结构域(SRKJ)的编码区以及羽衣甘蓝(B.oleracea var.acephala)ARC1基因不同片段长度的基因组DNA与编码区,分别构建以pGBKT7为载体的长度依次递减的ARC1a、ARC1b、ARC1c和ARC1d的重组“诱饵”质粒和以pGADT7为载体的SRKJ的重组猎物质粒,并将重组质粒转化酵母菌株进行蛋白质相互作用检测.结果显示:羽衣甘蓝ARC1存在5个连续的臂重复区,与结球甘蓝ARC1的氨基酸序列一致性达到98％；构建的重组表达载体在酵母细胞中无毒性和自激活作用产生；3个实验组Y2HGold[pGBKT7-A RC1a] ×Y 187 [pGADT7-SRKJ]、Y2HGold [pGBKT7-ARC1c] ×Y187 [pGADT7-SRKJ]和Y2HGold[pGBKT7-ARC1d] ×Y187 [pGADT7-SRKJ]同时激活了4种报告基因AUR1-C、MEL1、HIS3和ADE2；表明羽衣甘蓝ARC1与结球甘蓝的SRK激酶结构域能够发生相互作用,且互作的区域位于连续的臂重复区,其与结球甘蓝ARC1的氨基酸差异不足以引起互作区正确构象的改变.研究结果为芸薹属植物自交不亲和反应的分子机理提供新内容.