实时定量PCR检测耐异烟肼结核分枝杆菌Ag85B、38kDa及MPT64mRNA表达水平

• 作者: 张娟 张辉 李永祥 王远志 米利古 袁俐 陈伟 魏克娜
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 Ag85B 38kDa MPT64 实时定量PCR
• 年，卷（期）: 2011,（11）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 991-994
• 分类号: R378
• 字数: 3308字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2011.11.010

摘要

目的 运用实时定量PCR(Real-time PCR)检测结核分枝杆菌耐异烟肼菌株和敏感株Ag85B、38kDa及MPT64编码基因(fbpB、psts1、mpt64)的mRNA表达水平,探讨结核分枝杆菌耐异烟肼株和敏感株的蛋白抗原在转录水平的差异性.方法 根据GenBank提供的序列,设计目的基因fbpB、psts1、mpt64及内参基因Siga的特异引物,将fbpB、psts1、mpt64及Siga扩增片段克隆入载体pMD18-T simple,重组质粒经纯化及倍比稀释,应用SYBR GreenⅠ荧光染料建立检测fbpB、psts1、mpt64的实时定量PCR方法,并应用此方法检测22株耐异烟肼菌株及25株敏感菌株(含H37Rv标准株)中fbpB、psts1、mpt64的mRNA表达水平.结果耐异烟肼菌株的fbpB表达水平为0.65±0.22,敏感菌株的表达水平为0.36±0.13,两者有显著性差异(t=5.683,P＜0.01).耐异烟肼菌株的psts表达水平为13.63±4.16,敏感菌株的表达水平为9.86±2.79,两者差异有统计学意义(t=3.869,P＜0.01).耐异烟肼菌株的mpt64表达水平为5.89±3.22,敏感菌株的表达水平为7.67±4.52,差异无统计学意义(t=1.552,P＞0.05).结论 成功建立了fbpB、psts1、mpt64基因的实时定量检测方法,检测显示耐异烟肼菌株的fbpB、psts1基因的mRNA表达水平显著高于敏感菌株,可能为耐异烟肼MTB的实验室诊断提供分子标识.