抗vWF-A3区特异性单抗SZ-123单链抗体的构建和表达

• 作者: 姚拾秀 李雪美 江淼 王菲菲 赵益明 阮长耿
• 来源期刊: 苏州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: vWF-A3区 单链抗体(ScFv) 原核表达
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 874-878
• 分类号: R331|Q78
• 语种: 中文

摘要

目的 以能与vWF-A3区特异结合的单克隆抗体SZ-123为模板,构建其单链抗体,为深入研究vWF-A3结构与功能的关系提供有力的工具.方法 通过逆转录及多聚酶链反应,扩增并克隆单抗SZ-123的可变区基因VH、VL,经测序后加入连接肽,构建成SZ-123单链抗体(SZ-123 ScFV),并在大肠杆菌中进行表达.采用酶联免疫吸附试验( ELISA)和Western blot方法验证SZ-123 ScFV的免疫原性.结果 VH、VL可变区基因符合小鼠抗体可变区特征,SZ-123 ScFV基因拼接正确.表达产物除少量为分泌型外,主要以包涵体形式存在,表达量占菌体蛋白的20％.经过变性和复性后,获得具有生物活性的高纯度单链抗体片段.结论 成功表达了SZ-123单链抗体,该小分子抗体具有特异结合vWF-A3区的能力.