重组鼠疫耶尔森菌LcrV抗原制备工艺的建立

• 作者: 万艳 傅林锋 吴智远 常娅莉 王秉翔 王革 胡丽娜 韩少波 马维民 魏东
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 耶尔森菌,鼠疫 LcrV抗原 大肠杆菌 发酵 纯化
• 年，卷（期）: 2011,（12）
• 所属期刊栏目: 预防制品
• 页码范围: 1454-1459
• 分类号: R378.6+1|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 建立稳定、高效的重组鼠疫耶尔森菌LcrV抗原工程菌的发酵与纯化工艺.方法 研究LcrV工程菌pET-V/BL21 (DE3)在试管和三角摇瓶中的生长和表达规律,对种子培养基、IPTG诱导时机、诱导时间及诱导浓度进行优化,并放大至30 L发酵罐培养,建立稳定的发酵工艺.收获菌体,经冻融、离心收集蛋白溶液,高压匀浆处理后,分别采用Q.Sepharose HP阴离子交换层析、Phenyl Sepharose 6 FF(hs)疏水层析及Superdex 75 pg凝胶过滤层析三步柱层析纯化,建立稳定的纯化工艺,连续纯化3批,并按《中国药典》三部(2010版)的相关要求进行全面检定.结果 经优化的条件培养及诱导表达,工程菌的收菌密度(A600值)可达34,LcrV抗原的表达量达36％,含量为1.6 g/L.发酵产物经柱层析纯化,LcrV产量高于140 mg,纯度大于95％,蛋白总回收率达8.5％以上.各项检定指标均符合《中国药典》三部(2010版)的相关要求.结论 已建立了稳定的、适合规模化生产的LcrV制备工艺,为新型鼠疫组分疫苗的研制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩少波		5	18	3.0	4.0
2	常娅莉		13	73	4.0	8.0
3	傅林锋		9	29	4.0	5.0
4	魏东	中国食品药品检定研究院细菌一室	29	40	3.0	5.0
5	胡丽娜		9	13	2.0	3.0
6	王革		10	18	2.0	3.0
7	万艳		4	7	2.0	2.0
8	吴智远		3	6	2.0	2.0
9	马维民		2	8	2.0	2.0