人肝细胞核因子-1β基因cDNA全长的克隆与表达

• 作者: 常玲 徐少聪 杨坤 汪凌云 钱磊 陈兵 陈冠军 鲁云霞
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 肝细胞核因子-1β pET-28a(+) 高效表达 包涵体
• 年，卷（期）: 2011,（10）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 985-988
• 分类号: R349.83
• 字数: 3662字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2011.10.001

摘要

目的 构建人肝细胞核因子-1β (hHNF-1β)基因cDNA全长的原核表达质粒[pET-28a(+)-hHNF-1β]并在大肠杆菌(E.Coli)中高效表达.方法 提取正常成人肝脏组织的总RNA,RT-PCR后的扩增产物回收,构建克隆载体pMD-HNF-1β,设计带酶切位点BamHⅠ和Hind Ⅲ的引物,PCR后酶切连入pET-28a(+)中,转化DE3,测序后IPTG诱导表达,Western blot检测其特异表达,并对重组hHNF-1β(rhHNF-1β)诱导表达时IPTG的浓度、时间和温度等条件进行了优化.结果 测序证实所得的hHNF-1β cDNA序列与其在GenBank中的序列一致,重组质粒pET-28a(+)-hHNF-1β的双酶切结果与预期大小完全一致.IPTG诱导的最佳浓度是0.04 mmol/L,时间为6 h,温度为37℃.结论 成功克隆和构建了hHNF-1β基因的原核表达载体并对诱导表达的条件进行了优化,为进一步的功能分析奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈冠军	安徽医科大学生物化学教研室	12	36	4.0	5.0
2	钱磊	安徽医科大学生物化学教研室	3	0	0.0	0.0
3	陈兵	安徽医科大学生物化学教研室	28	94	5.0	7.0
4	汪凌云	安徽医科大学生物化学教研室	7	45	4.0	6.0