苹果L-半乳糖-1-磷酸磷酸酶cDNA克隆及其表达

• 作者: 张敏 李明军 梁东 郭春苗 马锋旺
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 苹果 L-半乳糖-1-磷酸磷酸酶 原核表达 多克隆抗体 抗坏血酸
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 园艺
• 页码范围: 762-770
• 分类号: S661.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.04.014

摘要

[目的]了解苹果果实L-半乳搪-1-磷酸磷酸酶(L-galactose-1-phosphate phosphatase,GPP)基因的特性,探索苹果GPP基因表达特性及其与抗坏血酸(ascorbic acid,AsA)水平的关系.[方法]通过RT-PCR从苹果果实中克隆GPP全长cDNA,分析其序列特征,进行原核表达,制备GPP特异抗体,分析GPP mRNA及其蛋白表达水平与苹果不同组织AsA的关系.[结果]从'嘎啦'苹果果实中克隆的GPP cDNA(GenBank登录号为FJ752240)包含的最大开放阅读框(open reading frame,ORF)为813 bp,编码270个氨基酸残基,预测分子量为29 kD,该基因与其它植物报道的GPP基因具有较高的相似性,但与肌醇-1-磷酸磷酸酶基因差异较大.构建的pET-32a(+)-GPP载体在大肠杆菌BL21(E.coli BL21)中异源表达后,获得主要以包涵体存在约50 kD的融合蛋白GPP-His(His约21 kD).以该蛋白制备抗体,与重组蛋白的Western杂交表明该抗体能与GPP发生特异反应.对苹果可溶性蛋白杂交显示,苹果体内GPP蛋白约33kD.在苹果不同组织中,GPP mRNA与蛋白质的相对表达水平与AsA含量存在明显的一致性.[结论]以单体形式存在的苹果GPP蛋白具有翻译后修饰特性,且该基因的表达在苹果AsA合成调控中可能起重要作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张敏	西北农林科技大学园艺学院	39	453	8.0	21.0
2	梁东	西北农林科技大学园艺学院	40	526	13.0	21.0
3	马锋旺	西北农林科技大学园艺学院	150	2555	28.0	42.0
4	李明军	西北农林科技大学园艺学院	21	329	11.0	18.0
5	郭春苗	西北农林科技大学园艺学院	2	17	2.0	2.0