水稻L-半乳糖内酯脱氢酶基因的克隆和原核表达及抗体的制备

• 作者: 俞乐 刘拥海 彭新湘
• 来源期刊: 湖南农业大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 水稻 L-半乳糖内酯脱氢酶 原核表达 抗体
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 381-384,429
• 分类号: Q785
• 字数: 2999字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1238.2010.00381

摘要

应用RT-PCR技术从水稻叶片中克隆了水稻L-半乳糖内酯脱氢酶(GLDH)的全长基因.序列分析表明,水稻GLDH基因全长1 752 bp,亚克隆其部分成熟蛋白编码基因(789 bp),利用基因重组技术构建了E.coli/ pET30a-GLDHe,经酶切鉴定,DNA测序,证实重组质粒构建正确;将重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析证实表达出相对分子质量约为36 000的蛋白.用原核表达蛋白作为抗原免疫家兔制备抗体,用Western blot检测抗体的特异性及效价,结果表明,抗体血清效价为1∶1 000,在加IPTG诱导后的菌液中可以检测到相应的蛋白条带((相对分子质量为36 000)),在水稻叶片样品中能检测到1条相对分子质量为36 000的蛋白条带.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	彭新湘	华南农业大学生命科学学院	39	545	13.0	22.0
2	刘拥海	肇庆学院生命科学学院	31	372	12.0	18.0
3	俞乐	华南农业大学生命科学学院	31	351	11.0	18.0