β半乳糖苷酶的筛选、克隆表达、酶学性质及其酶法合成低聚半乳糖

• 作者: 何冰芳 吴斌 王欣
• 来源期刊: 生物加工过程
• 学科: 生物学
• 关键词: Erwinia billingiae β半乳糖苷酶 克隆表达 酶法合成 低聚半乳糖
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 研究与开发
• 页码范围: 30-35
• 页数: 6页
• 分类号: Q93
• 字数: 4838字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3678.2015.06.006

摘要

采用人工底物邻硝基苯酚β D 半乳糖苷（ oNPG）为筛选标记，从耐有机溶剂微生物菌库中，筛选出具有较高水解活性的β半乳糖苷酶产生菌，再以乳糖为底物考察菌株低聚半乳糖的合成性能，筛选得到1株产β半乳糖苷酶的Erwinia billingiae WX1。根据GenBank中相同属种的基因组序列推测β半乳糖苷酶基因，克隆得到β半乳糖苷酶基因gal，并在大肠杆菌中实现了来源于Erwinia billingiae菌β半乳糖苷酶的克隆表达。该基因的开放阅读框（ORF）为1428 bp，编码475个氨基酸，理论相对分子质量为5?2×104。镍柱法分离纯化得到电泳纯的β半乳糖苷酶GAL，其酶学性质研究表明最适催化温度55℃，最适pH 7?0；Mg2＋、Mn2＋对该酶起较强促进作用， EDTA对该酶抑制作用较强。利用β半乳糖苷酶GAL的转糖基作用，以乳糖为底物合成低聚半乳糖，初步优化的反应条件：底物乳糖质量浓度400 g／L，每克乳糖添加酶量1?0 U，在40℃反应16 h后，低聚半乳糖合成率达到34％（质量分数），显示了较好的开发前景。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴斌	南京工业大学生物与制药工程学院	51	343	11.0	17.0
2	何冰芳	南京工业大学生物与制药工程学院	91	785	14.0	24.0
3	王欣	南京工业大学生物与制药工程学院	25	91	5.0	8.0