HPC2突变体真核表达载体的构建

• 作者: 何菲 刘鲜艳 吴炜 姜勇 赵明
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: HPC2 基因表达 突变 U2OS细胞
• 年，卷（期）: 2011,（12）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1099-1102
• 分类号: Q78
• 字数: 3414字
• 语种: 中文
• DOI: 21-1227/R.20111226.1612.005

摘要

目的 构建在哺乳动物细胞表达的HPC2真核表达突变载体,并在U2OS细胞中表达.方法 从人U2OS细胞中克隆HPC2cDNA片段,并利用Gateway技术构建pcDNA3.2/V5/HPC2质粒.将质粒用脂质体瞬时转染U2OS细胞,细胞裂解后用Western blot分析HPC2的表达情况.设计突变引物,以HPC2质粒为模板进行PCR,将PCR产物连接并转化扩增,得到特定位点突变的pcDNA HPC2质粒.结果 PCR、酶切、测序均表明pcDNA-V5/HPC2突变质粒构建成功,并可在U2OS细胞中表达.结论 成功构建了pcDNA-V5/HPC2突变真核表达载体,为研究HPC2的功能提供了有力的工具.