犬MC4R突变体D90N真核表达载体的构建及表达

• 作者: 宋慧娟 巴彩凤 张轶博 武洁 王光川 魏嘉
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 犬 黑皮质素受体4 真核表达载体 MDCK细胞 D90N
• 年，卷（期）: 2010,（12）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 6118-6121,6124
• 分类号: Q786
• 字数: 4974字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2010.12.019

摘要

[目的]构建犬黑皮质素受体4(MC4R)突变体D90N真核表达载体,并在MDCK细胞中进行表达.[方法]以犬MC4R基因组DNA为模板,应用重叠PCR扩增MC4R突变体D90N目的基因,将扩增产物进行T-A克隆;酶切、测序鉴定成功后将目的基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A.重组体pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R-D90N经酶切和测序鉴定;采用FuGENE HD介导转染技术将重组体导入MDCK细胞;转染后继续培养72.0 h,提取细胞内总RNA,用RT-PCR鉴定目的基因的表达;提取细胞总蛋白,用Western Blot检测蛋白表达.[结果]构建带标签的pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R-D90N重组真核表达载体,测序结果显示含有D90N突变位点.RT-PCR和Western Blot检测到目的基因表达.[结论]成功构建犬真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R-D90N,重组体能在MDCK细胞中表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	巴彩凤	辽宁医学院实验动物中心	91	369	10.0	14.0
2	魏嘉	辽宁医学院科学实验中心	23	210	8.0	13.0
3	武洁	辽宁医学院病理教研室	8	10	2.0	2.0
4	王光川	辽宁医学院实验动物中心	11	30	3.0	5.0
5	宋慧娟	辽宁医学院科学实验中心	19	40	3.0	4.0
6	张轶博	辽宁医学院免疫与病原生物学教研室	18	62	4.0	6.0