猪MC4R基因突变体真核表达载体的构建及功能研究

• 作者: 张欣 杨国宇 王江 褚贝贝 郭豫杰 韩立强 鲁维飞
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 黑素皮质素受体-4 突变体 表达
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 679-685
• 页数: 7页
• 分类号: S828|S813.3
• 字数: 4564字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.04.006

摘要

为研究MC4R基因不同突变体的功能差异,本研究从猪肌肉组织中克隆得到MC4R基因的编码序列,将克隆片段与pcDNA3.1真核表达载体进行Kpn Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切,连接形成重组表达载体MC4R1,将载体转染BHK细胞后Western blotting检测蛋白表达.通过点突变法得到MC4R基因在707/892位点的3个突变载体,将突变载体瞬时转染到BHK细胞,采用免疫荧光对细胞进行标记,通过激光共聚焦显微镜和流式细胞检测荧光表达,结果发现,克隆的MC4R1基因序列长度大约1 000 bp,在707/892位点序列为G/G,将构建的真核表达载体MC4R1转染BHK细胞,经过Western blotting检测发现MC4R1蛋白正常表达;通过点突变法得到在707/892位点突变的突变载体MC4R2 (G/A)、MC4R3 (A/G)、MC4R4 (A/A),经过激光共聚焦观察荧光表达后发现,突变受体在细胞膜上均有正常表达,流式检测发现4个突变受体表达的荧光平均强度并没有显著差异(P＞0.05).通过构建MC4R基因突变载体后发现,707/892位点突变对于MC4R受体在细胞膜的表达没有显著影响,其具体机制作用还需深入研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭豫杰	河南农业大学农业部动物生化与营养重点实验室	55	124	5.0	8.0
2	鲁维飞	河南农业大学农业部动物生化与营养重点实验室	27	69	4.0	7.0
3	韩立强	河南农业大学农业部动物生化与营养重点实验室	114	497	11.0	15.0
4	王江	河南农业大学农业部动物生化与营养重点实验室	12	13	2.0	3.0
5	张欣	华中农业大学教育部动物遗传育种与繁殖重点实验室	12	75	4.0	8.0
6	褚贝贝	河南农业大学农业部动物生化与营养重点实验室	7	0	0.0	0.0