哈茨木霉几丁质合酶基因ThChsC的克隆及序列分析

• 作者: 冀颖 刘卫德 李梅 牛静 田云龙 蒋细良
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 哈茨木霉 几丁质合酶 基因克隆 序列分析
• 年，卷（期）: 2011,（17）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 3537-3546
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.006

摘要

[目的]克隆哈茨木霉几丁质合酶基因全序列,并对序列进行生物信息学分析.[方法]利用多聚酶链式反应( PCR)和染色体步移技术(genome walking)克隆几丁质合酶基因全序列；应用生物信息学软件对获得的基因序列及编码的蛋白序列进行分析；通过同源建模,对蛋白质的三维结构进行预测.[结果]从哈茨木霉(Trichoderma harzianumTh-33)中扩增得到几丁质合酶基因ThChsC( GenBank登录号HQ419000),编码区(CDS)长为2835 bp,由4个外显子和3个内含子组成,开放阅读框(ORF)长2688 bp,编码895个氨基酸.序列比对和同源性分析显示,该基因与串珠状赤霉(Gibberella moniliformis,ACY08039.1)和禾生刺盘孢菌(Colletotrichum graminicola,AAL23718.1)几丁质合酶基因相似性最高,分别为80％和81％；相应的氨基酸序列同源性均为80％,系统进化分析表明,ThChsC属于Ⅲ型几丁质合酶亚家族.几丁质合酶ThChsC含有1个Chitin_synth_1结构域,1个Chitin_synth_1N结构域,1个Chitin_synth_2结构域,3个跨膜结构域,不含信号肽,为膜结合蛋白.对预测的三维结构分析表明,ThChsC含有糖基转移酶的保守DHD结构域.[结论]从哈茨木霉Th-33中克隆得到几丁质合酶基因ThChsC,对该基因的深入研究有助于探索哈茨木霉几丁质合成的机制.