小鼠Calb2基因重组腺病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 代晓南 刘嘉茵 刘珊 崔毓桂 王菁 罗建 高莉 高超
• 来源期刊: 国际生殖健康/计划生育杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Calb2基因 腺病毒科 遗传载体 泌尿生殖系统
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 261-264,327
• 分类号: R373
• 字数: 3443字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-1889.2012.04.003

摘要

目的:为了体外研究Calretinin(Calb2)基因在生殖系统、神经系统、视觉传导中的作用,构建小鼠Calb2基因表达重组腺病毒载体.方法:用反转录聚合酶链反应( RT-PCR)方法,以小鼠Calb2 cDNA为模板,扩增Calb2基因.亚克隆后,将Calb2基因片段克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上,构建穿梭质粒pAdTrack-Calb2.将穿梭质粒pAdtrack-Calb2转化至BJ-5183感受态细菌中,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组,获得重组质粒AdCMV-Calb2.重组质粒AdCMV-Calb2转染AD-293细胞,进行病毒包装和扩增,通过绿色荧光蛋白(GFP)报告基因观察重组病毒的产生.同时,构建对照腺病毒载体AdCMV-GFP.用获得的重组腺病毒感染AD-293细胞,通过观察GFP检测感染效率、蛋白质印迹方法检测Calb2基因的表达.结果:测序和酶切鉴定重组腺病毒质粒构建正确;经AD-293细胞包装后可观察到GFP表达;获得的重组腺病毒载体体外感染AD-293细胞,观察到GFP表达;经蛋白质印迹方法检测,与未感染腺病毒载体组(Mock)和感染对照腺病毒载体组(AdCMV)相比,Calb2基因腺病毒载体(AdCMV-Calb2)感染组CALB2蛋白水平显著增高(P＜0.05).结论:成功构建了小鼠Calb2基因重组腺病毒载体,并在AD-293细胞超表达,为课题组研究Calb2基因在生殖相关疾病的生理与病理生理作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘嘉茵	南京医科大学第一附属医院生殖医学中心	241	1685	19.0	30.0
2	王菁	南京医科大学第一附属医院生殖医学中心	17	38	4.0	5.0
3	高莉	南京医科大学第一附属医院生殖医学中心	16	60	4.0	7.0
4	代晓南	南京医科大学第一附属医院生殖医学中心	7	36	3.0	6.0
5	高超	南京医科大学第一附属医院生殖医学中心	7	35	3.0	5.0
6	刘珊	南京医科大学第一附属医院生殖医学中心	5	23	3.0	4.0
7	罗建	南京医科大学第一附属医院生殖医学中心	2	5	2.0	2.0