二肽基肽酶-Ⅳ的制备及其抑制剂体外筛选模型的优化

• 作者: 刘洪英 张立宏 王莉莉 陈伟
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: Caco-2细胞 二肽基肽酶-Ⅳ 比色法 DPP-Ⅳ抑制剂
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 835-838
• 分类号: R915
• 字数: 5854字
• 语种: 中文

摘要

目的 从分化的Caco-2细胞中提取二肽基肽酶-Ⅳ(DPP-Ⅳ),并建立和优化分子水平DPP-Ⅳ抑制剂的通量筛选模型.方法 诱导Caco-2细胞分化并高表达DPP-Ⅳ,提取DPP-Ⅳ,探索酶的存放时间对酶活性的影响;以甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺(Gly-Pro-PNA)为底物,采用发色底物法检测二肽基肽酶-Ⅳ活性,同时对反应体系的酶用量、底物浓度、反应温度和反应pH进行了优化.结果 与结论 Caco-2细胞培养17 d时DPP-Ⅳ含量达峰值;在-80℃条件下,存放18个月对酶活性无明显影响;确定DPP-Ⅳ抑制剂筛选模型反应体系的最适反应条件为:反应酶用量为50 μg/L蛋白、底物浓度为4 mmol/L、25℃、pH为7.6;通过该模型对所合成的靶向DPP-Ⅳ的抑制剂类化合物进行筛选,发现5个活性化合物.所述方法提取的DPP-Ⅳ酶及建立的DPP-Ⅳ抑制剂的筛选模型可用于DPP-Ⅳ抑制剂类的早期高通量筛选.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈伟	军事医学科学院毒物药物研究所	33	159	7.0	11.0
2	刘洪英	军事医学科学院毒物药物研究所	22	51	4.0	5.0
3	王莉莉	军事医学科学院毒物药物研究所	73	579	12.0	21.0
4	张立宏	军事医学科学院毒物药物研究所	1	1	1.0	1.0