抗黄曲霉毒素单链抗体基因的克隆与表达

• 作者: 张奇 张文 李园园 李培武 李鑫
• 来源期刊: 中国油料作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 黄曲霉毒素 抗体可变区 单链抗体
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 测试与加工
• 页码范围: 528-532
• 页数: 5页
• 分类号: S379.7
• 字数: 3428字
• 语种: 中文

摘要

为降低黄曲霉毒素抗体制备成本,在已有的能分泌抗黄曲霉毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞系8F6的基础上,成功克隆得到了该单克隆抗体的重链(VH)和轻链可变区(VL)基因片段.通过重叠延伸PCR的方法将轻、重链可变区基因连接,并引入连接肽(Linker)编码序列,构建VH-Linker-VL结构的单链抗体(ScFv)基因,并将该基因克隆到噬菌体表达载体pCANTAB 5E上,使单链抗体以噬菌体展示形式在大肠杆菌TG1中表达.间接竞争ELISA方法检测到该ScFv对黄曲霉毒素B1的抑制率(IC50)值为0.57ng/mL,表明该单链抗体与亲本鼠单抗有相同的抗原结合特异性,且具有很高灵敏度.