企鹅珍珠贝组织蛋白酶D的cDNA克隆、序列特征分析和应激表达研究

• 作者: 喻达辉 成书营 潘俐玲 王晓宁 黄桂菊
• 来源期刊: 南方水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 企鹅珍珠贝 组织蛋白酶D LPS刺激 弧菌刺激 组织表达模式
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 22-29
• 分类号: S917.4
• 字数: 4519字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-0780.2012.02.004

摘要

笔者初步研究了企鹅珍珠贝(Pteria penguin)组织蛋白酶D( cathepsin D,CTSD)的基因克隆和功能,通过同源克隆方法和cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得了企鹅珍珠贝组织蛋白酶D基因(命名为pgCTSD).该基因cDNA全长1 767 bp,其中5′UTR为38 bp,3′UTR为553 bp,ORF为1176 bp,编码392个氨基酸,包括信号肽( Met1 -Ala18)、前体域(Leu19-Lys47)和成熟域(Tyr48 -Ser392)三部分,分子量为42.3 kDa,等电点为8.04.pgCTSD 氨基酸序列与大珠母贝(Pinctada maxima)pmCTSD的相似性最高(79％),与其他物种的相似性为59％ ～ 75％.荧光定量分析表明,空白对照组中pgCTSD mRNA在闭壳肌、性腺、肝胰脏、外套膜和鳃组织中都有表达,且在闭壳肌中表达量最少,肝胰脏中最高.与试验对照组相比,脂多糖(LPS)刺激6h后性腺和肝胰脏显著下降,闭壳肌的表达量虽不大但增加显著,外套膜和鳃组织变化不显著；哈维弧菌(Vibrio harveyi)刺激6h后肝胰腺和外套膜显著下降,闭壳肌和鳃显著上升,性腺无显著变化.肝胰腺中pgCTSD对LPS和弧菌刺激的应答反应表明pgCTSD可能参与了免疫反应.