福建道地药材枇杷叶ISSR反应体系的建立与优化

• 作者: 张亚敏 徐榕青 李婷 林文津
• 来源期刊: 中国现代应用药学
• 学科: 医学
• 关键词: 枇杷叶 简单重复间隔序列 反应体系 优化
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 中药与天然药
• 页码范围: 315-319
• 页数: 5页
• 分类号: R282.2
• 语种: 中文

摘要

目的 建立适于福建产枇杷叶的ISSR分析的PCR反应体系,筛选适宜引物,并确定最佳退火温度.方法 改良的CTAB法提取嫩叶中DNA,通过单因子实验分别找出合适的ISSR-PCR反应条件,利用梯度PCR确定引物最佳退火温度.结果 适于枇杷叶ISSR最佳的反应体系为:总反应体积为25μL,其中模板DNA 60 ng,Taq DNA聚合酶0.9 U,引物浓度0.4μmol·L-1,dNTP浓度200 μmol.L-1,10×Buffe(含Mg2+) 2.5 μL,加入灭菌去离子水至25 μL.扩增程序为:预变性94℃7 min,变性94℃1min,复性最佳退火温度1min,延伸72℃1 min,35个循环,72℃延伸10 min.在100条引物中筛选出14条扩增条带清晰且条带数目较多的引物,最佳退火温度为48～58℃(因引物不同而异).结论 建立了枇杷叶ISSR最佳反应体系,筛选出14条引物并确定了最佳退火温度,为应用ISSR技术鉴定枇杷叶的种质资源和遗传多样性研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐榕青		72	328	9.0	15.0
2	林文津		63	312	7.0	15.0
3	张亚敏		45	185	6.0	12.0
4	李婷		1	0	0.0	0.0