花鳗鲡重组促黄体生成素在毕赤酵母中的表达

• 作者: 张勇 李文笙 李波 李阳源 林浩然 毛黎敏 陈国华 黄海
• 来源期刊: 中山大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 花鳗鲡 促黄体生成激素 linker 共表达载体pPICZαA-LHβα 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 页码范围: 86-90,96
• 分类号: Q575+.12
• 字数: 4240字
• 语种: 中文

摘要

采用聚合酶链反应从花鳗鲡垂体cDNA中分别扩增出GTHα、LHβ基因,再利用搭桥技术,中间以linker将两个基因连接成单个基因LHβα.然后利用双酶切、连接,将LHβα基因连接到载体pPICZαA中,构建出促黄体生成素的酵母共表达载体pPICZαA-LHβα.再利用电转化法将其转入到酵母野生型菌株X-33中,在含不同浓度的zeocinYPDS平板上筛选高拷贝转化子,阳性克隆经φ=0.7％甲醇诱导表达,表达产物采用SDS-PAGE和western blot进行分析,得到所表达的产物相对分子质量约为45 000.